產品名(ming)稱：永生化(hua)晶狀(zhuang)體上皮細(xi)胞
英文(wen)簡稱(cheng)：SRA01/04細胞

貨號：LZ-X969974
規(gui)格：T25
生長特性：貼(tie)壁(bi)

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凍存培養基(ji)：
凍(dong)存(cun)細(xi)胞(bao)時(shi)必須(xu)使用推(tui)薦的凍(dong)存(cun)培(pei)養基。凍(dong)存(cun)培(pei)養基中應含(han)有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養基。
1）細胞凍存培養(yang)(yang)基(ji)是一種(zhong)用于(yu)哺乳動物細胞的即用型*凍存培養(yang)(yang)基(ji)，其所(suo)含胎牛血(xue)清(qing)和牛血(xue)清(qing)比例經(jing)過優化，可改善細胞活(huo)力以及解(jie)凍后的細胞復蘇效果(guo)。 
2）凍存培(pei)養基是(shi)一種化學(xue)成分確定(ding)的、無蛋白、無菌凍存培(pei)養基，含(han)10% DMSO，適(shi)用于多種干細(xi)胞和(he)原(yuan)代細(xi)胞 (黑色素細(xi)胞除外) 的凍存。
培養細胞凍存方(fang)案：
以下(xia)實(shi)驗(yan)方案(an)介紹(shao)了培養(yang)細(xi)胞(bao)凍存的(de)(de)一般(ban)流程。詳(xiang)細(xi)的(de)(de)實(shi)驗(yan)方案(an)，必須參閱針對具體(ti)細(xi)胞(bao)的(de)(de)產品說明(ming)書。 
1.配制凍存培(pei)養(yang)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請(qing)注(zhu)意使用何種凍存培(pei)養(yang)基取(qu)決于所用細胞系(xi)。
2.凍存貼(tie)壁細(xi)胞(bao)時(shi)，利用傳代時(shi)所(suo)(suo)用方法輕柔(rou)地(di)使細(xi)胞(bao)從組織培養(yang)(yang)容(rong)器上脫離下來。用該(gai)細(xi)胞(bao)所(suo)(suo)需(xu)*培養(yang)(yang)基(ji)重新懸浮細(xi)胞(bao)。
3.采用、細胞(bao)(bao)(bao)計數(shu)儀(yi)按照臺盼藍拒染法或者(zhe)使用自動細胞(bao)(bao)(bao)計數(shu)儀(yi)測定總細胞(bao)(bao)(bao)數(shu)和活細胞(bao)(bao)(bao)百分(fen)比。根據所需(xu)活細胞(bao)(bao)(bao)密度，計算凍(dong)存培養基需(xu)要量(liang)。
4.以大約100-200×g的離(li)心力將細(xi)胞(bao)懸液離(li)心5至(zhi)10分鐘。在(zai)無菌(jun)條件下小(xiao)心倒(dao)掉(diao)上清(qing)液，不要攪動細(xi)胞(bao)沉淀。
注(zhu)：離心速度(du)和時間取(qu)決于細胞種類。
5.用預冷(leng)的凍存培養基重新懸浮細胞沉淀，將(jiang)其調整至(zhi)該(gai)細胞適合(he)的活(huo)細胞密度。
6.將細胞(bao)(bao)懸液分(fen)裝到若(ruo)干凍存管(guan)中。分(fen)裝時，應不時輕(qing)輕(qing)混合細胞(bao)(bao)，使其保持均勻(yun)的(de)細胞(bao)(bao)懸液狀態。
7.使用可控制降(jiang)溫(wen)速度(du)的冷(leng)凍裝置(zhi)冷(leng)凍細(xi)胞，使溫(wen)度(du)每分鐘大(da)約降(jiang)低  1°C。或者，將裝有細(xi)胞的凍存管放(fang)入凍存盒(he)中，然后(hou)將凍存盒(he)置(zhi)于-80°C條件下過夜。

實(shi)驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養液1瓶；8ml小牛(niu)血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒(shao)杯(bei)2個；
3、50ml離心筒2個 
4、滅菌(jun)培養皿(min)1個，細(xi)胞培養瓶(ping)1個 
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻(bo)璃攪(jiao)拌棒(bang)1個 
6、細胞計數板1塊(kuai)； 
7、滅(mie)好菌的鑷子1把，剪刀1把； 
8、酒精(jing)燈(deng)1臺；

實驗報告：
一、分離與培(pei)養：
   ;1、無菌條件(jian)下，取出(chu)1-3d 齡(ling)SD大鼠(shu)心房組(zu)織(zhi)，然(ran)后(hou)用PBS將此組(zu)織(zhi)塊(kuai)清洗(xi)2次，最(zui)后(hou)將組(zu)織(zhi)剪(jian)成(cheng)1mm3左右大小；
   2、往組(zu)織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和(he)0.1% I型(xing)膠原(yuan)酶），混懸10s，置37℃條件下(xia)消化10min，之后用滴管吹(chui)打制成單細(xi)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含(han)10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
   3、剩下(xia)的組(zu)織再加入(ru)3～4mL酶消化(hua)(hua)液，混懸10s，置37℃消化(hua)(hua)10 min后，按上(shang)述方法(fa)收集上(shang)清(qing)并終止消化(hua)(hua)后4℃放置，重復此步(bu)驟2-3次，直至組(zu)織*被消化(hua)(hua)；
   4、用(yong)200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清(qing)，沉(chen)淀(dian)細胞用(yong)含有10％ FBS DMEM/F12培養基混(hun)懸，接(jie)種于(yu)(yu)25cm2培養瓶，放置于(yu)(yu)37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
   5、差速(su)貼壁1h后，吸(xi)出培(pei)養基，按(an)實驗需要接(jie)種于6孔板中繼續培(pei)養；
二、免疫熒光(guang)鑒定：
   1、待心房肌細(xi)胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育(yu)的PBS沖洗(xi)細(xi)胞2次，每(mei)次10min，然后用4%多聚甲醛在(zai)室溫條件下固定細(xi)胞15min；
   2、PBS沖洗細胞2次(ci)，每(mei)次(ci)10min，然(ran)后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透(tou)膜15min；
   3、PBS沖洗細(xi)胞(bao)2次(ci)，每(mei)次(ci)10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xi)胞(bao)30min；
   4、按1: 100的比(bi)例(li)稀釋α-actin一抗，然后將其放在(zai)4℃冰(bing)箱(xiang)中孵(fu)育細胞過夜(ye)；
   5、PBS沖洗細胞3次，每(mei)次10min，按1：150的比例(li)稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件(jian)下放置1h；
   6、用(yong)PBS沖洗3次(ci)，每次(ci)10min，最后在(zai)倒置熒(ying)光顯微
鏡(jing)下(xia)觀察圖像并拍照。

注意事(shi)項(xiang)：
     盡管經(jing)測(ce)試Annexin V-FITC反(fan)復(fu)凍融(rong)5次對于其檢測(ce)效(xiao)果無顯著影響，但為取得良(liang)好的使用效(xiao)果，3-6個月內推薦4℃保(bao)存，并適當注意避免反(fan)復(fu)凍融(rong)。
     如果有(you)細菌或真(zhen)菌污染，會嚴(yan)重影響(xiang)檢測(ce)效果。
     染(ran)色后宜(yi)盡快檢測(ce)，時間(jian)過長可能會(hui)導致凋(diao)亡或壞死細胞的數量增加。
     如果細(xi)胞收集過程(cheng)中使用了胰(yi)酶，需注意設法去除殘留的胰(yi)酶。殘留的胰(yi)酶會消化(hua)并(bing)降解Annexin V-FITC，導致染(ran)色失(shi)敗。
     熒光(guang)物質均易發生(sheng)淬滅，在(zai)進行熒光(guang)觀察(cha)(cha)時(shi)，盡量縮短觀察(cha)(cha)時(shi)間，同時(shi)在(zai)操作(zuo)和存放過程中也(ye)盡量注意避光(guang)保(bao)存。
     用(yong)于(yu)流式細胞儀(yi)檢測(ce)時，如(ru)果發現(xian)Annexin V-FITC單獨染(ran)色(se)時出(chu)現(xian)了過(guo)多的PI假陽性細胞，并且通過(guo)調(diao)整(zheng)相關設置和參(can)數也無法改善(shan)，可以(yi)用(yong)PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后(hou)再(zai)進(jin)行檢測(ce)，這樣通常可以(yi)有效減(jian)少(shao)假陽性的壞死細胞。
     需自(zi)備PBS。
     本產品(pin)于(yu)專業人員的科學研究用，不(bu)得(de)用于(yu)臨床(chuang)診斷或治療，不(bu)得(de)用于(yu)食品(pin)或藥品(pin)，不(bu)得(de)存放于(yu)普通(tong)住(zhu)宅內。
     為(wei)了您的安全和健(jian)康，請(qing)穿實驗(yan)服并戴一次性手套操作。
鈣鹽染色液(硝酸銀法)Diacerein；雙醋瑞因磷脂酶D2（Phospholipase D2）活性熒光定量檢測試劑盒

銅鹽(yan)染(ran)色液(紅氨酸法)3,4-Dicaffeoylquinic acid；異綠原酸B磷脂酶D2（Phospholipase D2）磷脂轉移活性比色法定量檢測試劑盒

尿酸鹽染色(se)液(Gomori六銀法)3,4-Dicaffeoylquinic acid；異綠原酸B磷脂酶D2（Phospholipase D2）水解活性比色法定量檢測試劑盒

鉛鹽染(ran)色液(玫棕酸法)3,4-Dicaffeoylquinic acid；異綠原酸B磷脂尼羅紅（Nile Red）熒光染色試劑盒

鋁染色液(Lillie鋁試劑法)3,5-Dicaffeoylquinic acid；異綠原酸A磷脂皮爾斯（Pearse）染色試劑盒

亮綠染色液(1%)3,5-Dicaffeoylquinic acid；異綠原酸A硫酸酶（rhodanase）活性比色法定量檢測試劑盒

亮綠染色液(2%)3,5-Dicaffeoylquinic acid；異綠原酸A氯霉素乙酰基轉移酶（CAT）報告基因活性同位素薄層色譜（TLC）檢測試劑盒

亮綠SF染色液(1%)Diclofenac (Sodium)；雙氯芬酸鈉氯霉素乙酰基轉移酶（CAT）報告基因活性同位素定量檢測試劑盒

詹納斯綠B染色液(0.2%)Diclofenac (Sodium)；雙氯芬酸鈉氯霉素乙酰基轉移酶（CAT）報告基因活性熒光薄層色譜（TLC）檢測試劑盒

詹納斯綠B染色液(0.5%)Diclofenac (Sodium)；雙氯芬酸鈉氯霉素乙酰基轉移酶（CAT）報告基因活性熒光定量檢測試劑盒

線(xian)粒體(ti)染色液(ye)(Altmann法)Diethylstilbestrol；己烯雌酚絡氨酸磷酸酶（TP）活性比色法定量檢測試劑盒

甲(jia)基藍水(shui)溶液(Methyl blue,1%)Diethylstilbestrol；己烯雌酚絡氨酸磷酸酶（TP）活性熒光定量檢測試劑盒

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Sp100核抗原(Sp100)酶(mei)聯免(mian)疫吸附(fu)測(ce)定試劑盒 Human SDR39U1 ELISA Kit磷酸化組蛋(dan)白H3抗體(ti)

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43KDa Tar DNA結合蛋(dan)白(bai)(TDP43)酶聯免疫吸附測定試劑盒(he)Human SEC61alpha ELISA Kit肝生長因子激(ji)活抑制蛋(dan)白(bai)2抗(kang)體