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產品(pin)名稱：小鼠(shu)腎小球內(nei)皮細胞
英文簡稱：MGECs細胞

貨號：LZ-X969980
規格：T25
生長(chang)特性：貼壁(bi)

凍存培養基：
凍存(cun)細胞(bao)時必須使用(yong)推薦的凍存(cun)培養基。凍存(cun)培養基中(zhong)應(ying)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養基。
1）細胞凍(dong)(dong)存(cun)培養基是一種用于(yu)哺乳(ru)動物細胞的即用型*凍(dong)(dong)存(cun)培養基，其所含胎(tai)牛血(xue)清(qing)和牛血(xue)清(qing)比例經過優化，可(ke)改善細胞活力以及解凍(dong)(dong)后的細胞復蘇效果。 
2）凍存(cun)培(pei)養基是一種化學(xue)成分確定的(de)、無(wu)蛋白、無(wu)菌凍存(cun)培(pei)養基，含10% DMSO，適用于多(duo)種干(gan)細(xi)胞(bao)(bao)和原代細(xi)胞(bao)(bao) (黑色素(su)細(xi)胞(bao)(bao)除外(wai)) 的(de)凍存(cun)。
培養細胞凍存(cun)方案：
以下實驗方案(an)介紹了培養(yang)細胞凍(dong)存的一般流程。詳細的實驗方案(an)，必須(xu)參閱(yue)針(zhen)對具(ju)體細胞的產品說明(ming)書。 
1.配制凍存培(pei)養基，于(yu)2°C至8°C下儲存，直至使用(yong)。請(qing)注意使用(yong)何(he)種凍存培(pei)養基取(qu)決于(yu)所用(yong)細胞(bao)系。
2.凍(dong)存(cun)貼(tie)壁細(xi)(xi)胞(bao)時，利(li)用傳代(dai)時所(suo)用方法輕柔地使細(xi)(xi)胞(bao)從組織培(pei)(pei)養容器上脫離下來(lai)。用該細(xi)(xi)胞(bao)所(suo)需*培(pei)(pei)養基重新(xin)懸浮(fu)細(xi)(xi)胞(bao)。
3.采用、細胞計(ji)數(shu)儀按(an)照(zhao)臺盼藍拒(ju)染法(fa)或(huo)者(zhe)使用自動細胞計(ji)數(shu)儀測定總細胞數(shu)和活(huo)細胞百分比。根據所(suo)需(xu)活(huo)細胞密度，計(ji)算凍存培(pei)養基需(xu)要(yao)量。
4.以(yi)大約100-200×g的(de)離心力(li)將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)離心5至10分鐘。在無菌條(tiao)件下小心倒掉上清(qing)液(ye)，不要攪動細(xi)胞(bao)沉淀。
注：離心速度和(he)時間(jian)取決(jue)于細(xi)胞種類。
5.用(yong)預(yu)冷的(de)凍存(cun)培(pei)養基重(zhong)新懸浮(fu)細胞沉淀，將其調整至該細胞適合的(de)活(huo)細胞密度(du)。
6.將細(xi)(xi)胞(bao)懸液分裝到若干凍存管中(zhong)。分裝時(shi)，應不時(shi)輕輕混(hun)合細(xi)(xi)胞(bao)，使其保持均勻的細(xi)(xi)胞(bao)懸液狀態。
7.使(shi)用可控制降(jiang)溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使(shi)溫度每分(fen)鐘大約(yue)降(jiang)低(di)  1°C。或(huo)者，將裝有細胞的凍存(cun)(cun)管放(fang)入凍存(cun)(cun)盒(he)中，然后將凍存(cun)(cun)盒(he)置于-80°C條(tiao)件(jian)下過夜(ye)。

實驗材料： 
1. 50ml 配(pei)制(zhi)好的(de)RPMI1640培(pei)養(yang)液1瓶；8ml小牛(niu)血(xue)清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰(yi)蛋白(bai)酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒(shao)杯2個；
3、50ml離心筒2個(ge) 
4、滅菌培(pei)(pei)養皿1個(ge)，細胞(bao)培(pei)(pei)養瓶1個(ge) 
5、1ml ，200μl移液器(qi)各(ge)1支；槍頭盒(he)2個；無菌玻璃攪(jiao)拌棒1個 
6、細胞計數板1塊； 
7、滅好菌的(de)鑷子1把(ba)，剪刀1把(ba)； 
8、酒(jiu)精(jing)燈1臺；

實驗報告：
一、分離(li)與培養：
   1、無(wu)菌條件(jian)下(xia)，取出1-3d 齡SD大(da)鼠(shu)心房組(zu)織(zhi)，然后用PBS將此組(zu)織(zhi)塊(kuai)清(qing)洗(xi)2次，最后將組(zu)織(zhi)剪(jian)成1mm3左右大(da)小(xiao)；
   2、往組織塊中(zhong)加入4 mL酶消化液(ye)（0.1% 胰酶和0.1% I型(xing)膠(jiao)原酶），混懸(xuan)10s，置37℃條件下消化10min，之(zhi)后(hou)用滴(di)管吹打(da)制成單細胞懸(xuan)液(ye)，自然沉淀并(bing)收(shou)集上清，用含10% FBS培(pei)養基(ji)終(zhong)止消化后(hou)4℃放置；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶(mei)消(xiao)(xiao)化(hua)(hua)(hua)液(ye)，混懸10s，置37℃消(xiao)(xiao)化(hua)(hua)(hua)10 min后，按上述方法收集上清并終止消(xiao)(xiao)化(hua)(hua)(hua)后4℃放(fang)置，重(zhong)復此步驟2-3次(ci)，直至(zhi)組織*被消(xiao)(xiao)化(hua)(hua)(hua)；
   4、用(yong)200目不銹鋼(gang)篩網過濾細(xi)胞消化液，1200r/min 離心(xin)10min，棄去上清，沉淀細(xi)胞用(yong)含有10％ FBS DMEM/F12培養基(ji)混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中(zhong)培養；
   5、差速貼壁1h后(hou)，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細胞(bao)(bao)生長至80%融合(he)時，棄去培養(yang)基，用溫育的PBS沖洗細胞(bao)(bao)2次(ci)，每(mei)次(ci)10min，然(ran)后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞(bao)(bao)15min；
   2、PBS沖洗細胞(bao)2次，每(mei)次10min，然后在(zai)4℃條件(jian)下，用(yong)0.1％Triton X-100透(tou)膜15min；
   3、PBS沖洗細胞(bao)2次(ci)，每次(ci)10min，然后在室溫(wen)條件下，用4% BSA封(feng)閉細胞(bao)30min；
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗(kang)，然后(hou)將(jiang)其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
   5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比(bi)例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件(jian)下放置1h；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒(ying)光顯微
鏡下觀察(cha)圖像并(bing)拍照(zhao)。

Sorensen磷酸緩沖(chong)液(0.1mol/L,pH5.3-8.04)(-)-Epigallocatechin Gallate；表沒食子兒茶素沒食子酸酯縮酶（ADOLASE）活(huo)性比(bi)色法定量檢測試(shi)劑盒

Sorensen磷酸緩(huan)沖液(1×,pH6.2)(-)-Epigallocatechin Gallate；表沒食子兒茶素沒食子酸酯染色質免疫沉淀分析（CHIP）試劑盒

Sorensen磷酸(suan)緩沖液(ye)(10×,pH6.2)Epimedin A；朝藿(huo)定(ding)A染色質免疫沉淀分析（CHIP）*試劑盒（包括抗體）

TBS緩沖液(0.02mol/L,pH8.2)Epimedin A；朝藿定A人(ren)類巨(ju)病蛋白酶（HCMV PROTEASE）活性熒光淬滅法定量檢測(ce)試劑盒

TBS緩沖液(0.05mol/L,pH7.4)Epimedin B；朝藿(huo)定B人體鼻病(bing)（rhinovirus）定量PCR擴增檢(jian)測試劑(ji)盒

Tris-Maleate緩沖液(ye)(0.1mol/L,pH5.08-8.45)Epimedin B；朝藿定(ding)B人體(ti)鼻病（rhinovirus）定(ding)性檢測試劑盒(he)

Tris-Maleate緩(huan)沖液(ye)(1mol/L，pH5.0-8.5)Epmedin C；朝藿定C人體腺病（adenovirus）定量PCR擴增檢測試劑盒(he)

Tris-Maleate緩(huan)沖(chong)液(1mol/L，pH5.0-8.5)Epmedin C；朝藿定C人體腺(xian)病（adenovirus）定性檢(jian)測試劑盒

阿拉伯膠水溶液(ye)(10%)Ezetimibe；依澤替米貝/依折麥布溶酶體形態染色試劑盒

阿拉(la)伯膠(jiao)水溶(rong)液(25%)Ezetimibe；依澤替米貝/依折麥布溶酶體型酸性磷酸酶總活性比色法定量檢測試劑盒

緩沖(chong)液(5×,pH7.4)Ezetimibe；依澤替米貝/依折麥布溶酶體脂酶（酸性脂酶）活性比色法定量檢測試劑盒

鈉緩沖液(pH7.4)Erythromycin；紅霉素溶酶體脂酶（酸性脂酶）活性染色試劑盒

鈉溶液(ye)(0.1mol/L)Erythromycin；紅霉素肉堿棕櫚酰轉移酶（CARNITINE PALMITOYL－TRANSFERASE）總活性比色法定量檢測試劑盒

鈉(na)溶液(0.1mol/L)Erythromycin；紅霉素肉堿棕櫚酰轉移酶I（CARNITINE PALMITOYL－TRANSFERASE I）活性比色法定量檢測試劑盒

鈉緩沖液(0.1mol/L,pH8.6)Estradiol；β-雌二肉堿棕櫚酰轉移酶II（CARNITINE PALMITOYL－TRANSFERASE II）活性比色法定量檢測試劑盒
MGECs細胞XII B組磷脂酶(mei)A2(PLA2G12B)酶(mei)聯免疫(yi)吸(xi)附測定試劑(ji)盒Human A1BG(Alpha-1B-glycoprotein) ELISA Kit人瘤病16型E7抗體(ti)(ti)

髓系觸發受體-1(TREM-1)酶聯免疫吸附測定試劑盒Human SATB1 ELISA Kit人類狀瘤病58 E6蛋白抗體

黑素轉鐵蛋白(MFI2)酶聯免疫吸附測定試劑盒Human SATB2(Special AT-rich sequence-binding protein 2) ELISA Kit人類狀瘤病16抗體

抗酸性磷酸酶(ACP5)酶聯免疫吸附測定試劑盒Human SBDS ELISA Kit人類狀瘤病18 E7抗體

甲狀腺原(yuan)氨酸(Thyronine)酶聯免疫吸附測定試劑盒Human SA1 ELISA Kit人類狀瘤病31 E7抗體

脂(zhi)聯素(su)(ADP/Acrp30)酶聯免疫吸附測定試劑盒Human SCAP ELISA Kit轉錄因子HES2抗體

集(ji)聚蛋白(AGRN)酶聯免疫吸附測定試劑盒 Human SAPS3 ELISA Kit轉錄因子HES3抗體
注意(yi)事項：
     盡(jin)管經測(ce)試Annexin V-FITC反(fan)復凍融5次對于其檢(jian)測(ce)效果(guo)無顯著影(ying)響，但為(wei)取得良好(hao)的使用效果(guo)，3-6個月內推(tui)薦4℃保存，并適當注意避免反(fan)復凍融。
     如果有細菌或真菌污染，會嚴重影響檢測效(xiao)果。
     染(ran)色后宜(yi)盡快(kuai)檢(jian)測，時間過長(chang)可能會導致凋亡(wang)或壞死(si)細胞的數量增加。
     如果細胞收集(ji)過程中使用了胰(yi)酶，需注意設法去除殘(can)(can)留的(de)胰(yi)酶。殘(can)(can)留的(de)胰(yi)酶會(hui)消化并降解Annexin V-FITC，導(dao)致染色失敗。
     熒光(guang)物(wu)質(zhi)均易發生淬滅，在(zai)進行(xing)熒光(guang)觀察(cha)時，盡量縮短觀察(cha)時間，同時在(zai)操作和存放過程中(zhong)也盡量注意避光(guang)保(bao)存。
     用于流式細胞儀檢測(ce)時，如果發現Annexin V-FITC單獨染色時出現了過多的PI假陽性細胞，并(bing)且通過調整相關(guan)設(she)置和參數也(ye)無法改(gai)善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行(xing)檢測(ce)，這樣(yang)通常可以有效(xiao)減少假陽性的壞死細胞。
     需自備PBS。
     本產品(pin)(pin)于(yu)專業人(ren)員的科學研究用，不(bu)得用于(yu)臨床診(zhen)斷(duan)或治(zhi)療，不(bu)得用于(yu)食品(pin)(pin)或藥(yao)品(pin)(pin)，不(bu)得存放于(yu)普通(tong)住(zhu)宅內。
     為了您的(de)安(an)全(quan)和健康，請穿實驗服并(bing)戴一(yi)次性手(shou)套操(cao)作。