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小鼠抑制素B(INH-B)elisa試劑盒操作步驟

發布時間: 2023-05-30  點擊次數: 120次

操作步驟:

1. 標(biao)準(zhun)品(pin)(pin)(pin)的稀(xi)(xi)釋(shi)(shi)與加(jia)(jia)樣:在(zai)酶標(biao)包被(bei)板上設標(biao)準(zhun)品(pin)(pin)(pin)孔(kong)10孔(kong),在(zai)di一、第(di)(di)二孔(kong)中(zhong)(zhong)分(fen)(fen)別(bie)(bie)(bie)(bie)加(jia)(jia)標(biao)準(zhun)品(pin)(pin)(pin)100μl,然(ran)(ran)后在(zai)di一、第(di)(di)二孔(kong)中(zhong)(zhong)加(jia)(jia)標(biao)準(zhun)品(pin)(pin)(pin)稀(xi)(xi)釋(shi)(shi)液50μl,混(hun)(hun)勻;然(ran)(ran)后從di一孔(kong)、第(di)(di)二孔(kong)中(zhong)(zhong)各取(qu)(qu)100μl分(fen)(fen)別(bie)(bie)(bie)(bie)加(jia)(jia)到(dao)第(di)(di)三(san)孔(kong)和第(di)(di)四孔(kong),再在(zai)第(di)(di)三(san)、第(di)(di)四孔(kong)分(fen)(fen)別(bie)(bie)(bie)(bie)加(jia)(jia)標(biao)準(zhun)品(pin)(pin)(pin)稀(xi)(xi)釋(shi)(shi)液50μl,混(hun)(hun)勻;然(ran)(ran)后在(zai)第(di)(di)三(san)孔(kong)和第(di)(di)四孔(kong)中(zhong)(zhong)先各取(qu)(qu)50μl棄(qi)掉,再各取(qu)(qu)50μl分(fen)(fen)別(bie)(bie)(bie)(bie)取(qu)(qu)50μl分(fen)(fen)別(bie)(bie)(bie)(bie)加(jia)(jia)到(dao)第(di)(di)七、第(di)(di)八孔(kong)中(zhong)(zhong),再在(zai)第(di)(di)七、第(di)(di)八孔(kong)中(zhong)(zhong)分(fen)(fen)別(bie)(bie)(bie)(bie)加(jia)(jia)標(biao)準(zhun)品(pin)(pin)(pin)稀(xi)(xi)釋(shi)(shi)液50μl,混(hun)(hun)勻后從第(di)(di)七、第(di)(di)八孔(kong)中(zhong)(zhong)加(jia)(jia)到(dao)第(di)(di)五、第(di)(di)六孔(kong)中(zhong)(zhong),再在(zai)第(di)(di)五、第(di)(di)六孔(kong)中(zhong)(zhong)分(fen)(fen)別(bie)(bie)(bie)(bie)加(jia)(jia)標(biao)準(zhun)品(pin)(pin)(pin)稀(xi)(xi)釋(shi)(shi)液50ul,混(hun)(hun)勻;混(hun)(hun)勻后從第(di)(di)五、第(di)(di)六孔(kong)中(zhong)(zhong)各分(fen)(fen)別(bie)(bie)(bie)(bie)取(qu)(qu)50μl加(jia)(jia)到(dao)第(di)(di)九、第(di)(di)十(shi)孔(kong)中(zhong)(zhong),再在(zai)第(di)(di)九第(di)(di)十(shi)孔(kong)分(fen)(fen)別(bie)(bie)(bie)(bie)加(jia)(jia)標(biao)準(zhun)品(pin)(pin)(pin)稀(xi)(xi)釋(shi)(shi)液50μl,混(hun)(hun)勻后從第(di)(di)九第(di)(di)十(shi)孔(kong)中(zhong)(zhong)各取(qu)(qu)50μl棄(qi)掉。(稀(xi)(xi)釋(shi)(shi)后各孔(kong)加(jia)(jia)樣量(liang)都為(wei)50μl,濃度分(fen)(fen)別(bie)(bie)(bie)(bie)為(wei)180 ng/L,120 ng/L ,60 ng/L,30 ng/,15 ng/L)。

2. 加(jia)樣:分別設(she)空(kong)白孔(空(kong)白對照孔不加(jia)樣品及酶(mei)標試劑,其(qi)余各步操作(zuo)相同)、待(dai)測樣品孔。在酶(mei)標包被板上待(dai)測樣品孔中先加(jia)樣品稀(xi)釋液40μl,然后再加(jia)待(dai)測樣品10μl(樣品最終稀(xi)釋度為5倍)。加(jia)樣將樣品加(jia)于酶(mei)標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混(hun)勻。

3. 溫育:用封板(ban)(ban)膜封板(ban)(ban)后(hou)置(zhi)37℃溫育30分鐘。

4. 配液:將30(48T的20倍(bei))倍(bei)濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍(bei))倍(bei)稀釋(shi)后(hou)備用。

5. 洗(xi)滌:小心揭掉封板膜,棄去液(ye)體(ti),甩干,每孔加滿洗(xi)滌液(ye),靜置30秒后棄去,如此(ci)重復5次,拍(pai)干。

6. 加(jia)酶(mei)(mei):每孔加(jia)入酶(mei)(mei)標試劑(ji)50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作(zuo)同(tong)3。

8. 洗滌:操作同5。

9. 顯(xian)(xian)色(se):每孔先加(jia)(jia)入(ru)(ru)顯(xian)(xian)色(se)劑(ji)A50μl,再加(jia)(jia)入(ru)(ru)顯(xian)(xian)色(se)劑(ji)B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯(xian)(xian)色(se)15分鐘.

10. 終(zhong)止(zhi):每孔加終(zhong)止(zhi)液50μl,終(zhong)止(zhi)反應(ying)(此時藍色(se)立轉黃色(se))。

11. 測定(ding):以空(kong)白空(kong)調(diao)零,450nm波長(chang)依序測量(liang)各(ge)孔的吸光度(OD值)。 測定(ding)應在(zai)加終(zhong)止液后15分鐘。雌二醇單克隆抗體

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