操作步驟：

  RIPA 裂解(jie)液 ( 強(qiang) )00mL哪里有(you)賣切取含有(you)目的DNA 片段的瓊脂(zhi)糖凝膠條帶(dai)。

   ● 盡量(liang)切除不(bu)含有目的(de)DNA 部分(fen)的(de)凝(ning)膠，減少凝(ning)膠體積，提高(gao)DNA 回(hui)收率。

   ● 切膠(jiao)時，請使用長波長UV  （360 nm ）光盒。且不要將DNA 長時間暴露在紫外(wai)燈(deng)下，以防DNA 損傷。

2  稱取凝膠的(de)重量近似地確(que)定其體積(ji)。

   ● 凝(ning)膠(jiao)(jiao)重量(liang)(liang)的(de)稱量(liang)(liang)方法：取.5 ml 離(li)(li)心管(guan)(guan)(guan)電子天平稱初質量(liang)(liang)，切膠(jiao)(jiao)裝(zhuang)在離(li)(li)心管(guan)(guan)(guan)后稱終質量(liang)(liang)，兩者(zhe)差即為膠(jiao)(jiao)的(de)質量(liang)(liang)。不同離(li)(li)心管(guan)(guan)(guan)的(de)重量(liang)(liang)可能有差異，因此，每個離(li)(li)心管(guan)(guan)(guan)的(de)重量(liang)(liang)需單獨(du)稱量(liang)(liang)。

3  按照每00 mg 瓊脂糖(tang)凝膠對應00 µl 溶液BD 的比例，向離心管中加入溶液BD。

4  50 ℃水(shui)浴(yu)7-0min，直(zhi)至(zhi)凝(ning)膠*溶化。期間(jian)需要振蕩混合3 次(ci)。

   ● 瓊脂糖必須*融化，以(yi)免堵塞柱子(zi)，嚴重影響DNA 段的回收效率(lv)。

   ● 如果總(zong)體積(ji)大于500 µl，可適當增(zeng)加溶(rong)膠時間。

   ● 若此時溶液變紅，可加(jia)0 µl 3M NaAC  （pH 5.2）。

5  將步驟4 所獲溶液置于DNA 純化柱中，靜(jing)置2min 。

   ● 膠塊*溶(rong)解后將膠溶(rong)液溫度降(jiang)至室(shi)溫再上(shang)柱，因為純化柱在(zai)較高溫度時結合DNA  的能力較弱。

6 ; 2,000 rpm 離心(xin)min。若溶液量(liang)大(da)于DNA 純化柱的(de)容積，可分(fen)兩次離心(xin)，棄濾液。

   ● 此時DNA 被吸附于DNA 純化柱中的(de)硅膠膜上。

7 ; 加入(ru)500 µl 溶液(ye)BD。2,000 rpm,  離心min，棄濾液(ye)

8  加入(ru)500 µl 溶液PE。2,000 rpm,  離心min，棄濾(lv)液。

   ● 溶液PE 初次(ci)使用(yong)前用(yong)無(wu)水(shui)乙(yi)醇按(an): 4 稀釋，即含80% 乙(yi)醇。

   ● 此步驟的(de)作用是將(jiang)硅膠膜上吸附的(de)蛋白、鹽(yan)等雜質(zhi)洗脫，以(yi)獲得高質(zhi)量DNA 段。

9  加入500 µl 溶液(ye)PE。2,000 rpm,  離心(xin)min，棄濾(lv)液(ye)。

0 2,000 rpm 離心(xin)  3min ，以*去除純化柱中的(de)液(ye)體(ti)。

   ● 此步驟的(de)作用是(shi)去除殘留乙醇，避(bi)免殘留乙醇影響后(hou)續酶促反應。同(tong)時也(ye)利于(yu)DNA 段的(de)充分溶解。

  將(jiang)離心柱置于(yu)(yu)新的.5 ml 離心管(guan)中。向純化柱的處，懸空滴加30-00 µl 溶液Eluent  （60℃預熱(re)），靜置2min 。2,000 rpm  離心min，管(guan)底即(ji)為目的DNA 段。貯存于(yu)(yu)-20℃。

   ● 溶液Eluent 可用無菌雙蒸(zheng)水代替，但其(qi)pH 需(xu)為8.0-8.5，加入體積(ji)視DNA 目的段的多(duo)少、用戶(hu)對目的濃度(du)要求而定。

   ● 對溶液Eluent 60℃預熱，會提高提取DNA 目(mu)的段的產量。