產品屬性：

需要而未提供的試劑和器材：

1. 產品僅用于科研標準(zhun)規格(ge)酶(mei)標儀

2. 高速離心機

3. 電熱恒溫培養箱(xiang)

4. 干凈的試(shi)管(guan)和(he)Eppendof管(guan)

5. 系列(lie)可(ke)調(diao)節移(yi)液器及吸頭(tou)，一次檢(jian)測(ce)樣(yang)品較多時，用多通道移(yi)液器

6. 蒸餾(liu)水，容量(liang)瓶等。

標本(ben)要(yao)求：

1．標本采集(ji)后盡早進(jin)行提(ti)(ti)取，提(ti)(ti)取按(an)相關文獻進(jin)行，提(ti)(ti)取后應盡快進(jin)行實驗。若不能馬上(shang)進(jin)行試(shi)驗，可將標本放于-20℃保存(cun)，但應避免反復凍融。

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧(yang)化物酶的（HRP）活性。

備試劑與收集血樣(yang)：

1.  收集標本：血(xue)清、血(xue)漿（EDTA 、檸檬(meng)酸(suan)鹽、肝素抗凝）、細胞培養上清液、組織(zhi)勻漿等盡早(zao)檢測， 2-8 ℃ 保存48 小(xiao)時(shi)(shi)；更長(chang)時(shi)(shi)間須冷凍（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反(fan)復凍融。

2.  標(biao)(biao)準(zhun)品(pin)液(ye)(ye)配制：使用前加(jia)(jia)入0.5ml 蒸餾水 混勻，配成 120 0ng/ml 的溶液(ye)(ye) 。 設標(biao)(biao)準(zhun) 管(guan) 8 管(guan)，管(guan)加(jia)(jia)標(biao)(biao)本(ben)稀釋液(ye)(ye) 900ul ，第二至第八管(guan)加(jia)(jia)入標(biao)(biao)本(ben)稀釋液(ye)(ye) 500ul 。在(zai)管(guan)中(zhong)(zhong)加(jia)(jia)入 120 0ng/ml 的標(biao)(biao)準(zhun)品(pin)溶液(ye)(ye) 100ul 混勻后用加(jia)(jia)樣(yang)器吸出 500ul ，移至第二管(guan) 。如此(ci)反復作對倍稀釋，從第七(qi) 管(guan) 中(zhong)(zhong)吸出 500ul 棄去。第八 管(guan) 為空白對照。

3.  10× 標本稀(xi)釋液用蒸餾水作(zuo) 1: 1 0 倍稀(xi)釋（ 示例(li)： 1ml濃稀(xi)釋液 +9ml 蒸餾水）。

4.  洗滌液(ye)：用重蒸水(shui) 1:20 稀釋（示例：1ml 濃(nong)縮洗滌液(ye)加入 19ml 的重蒸水(shui)）

檢測程序(xu)：

1.  加樣：每孔(kong)各加入標準品或待測(ce)樣品 100ul ，將反應(ying)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板：用(yong)洗滌液將反(fan)應板充分洗滌 4-6 次，向濾(lv)紙上印干。

3.  ;每孔中加入(ru)抗(kang)體工作液(ye)10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板(ban)：同前。

5.  每(mei)孔(kong)加酶標(biao)抗體工作(zuo)液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

樣本實驗前準備：

ELISA進口試劑盒液(ye)(ye)體樣本：包括血清、血漿、尿液(ye)(ye)、胸腹水(shui)、腦脊(ji)液(ye)(ye)、細胞(bao)培養上(shang)清等(deng)。

（1）血清

室溫血液自然凝(ning)固10-20分(fen)鐘(zhong)后，離心20分(fen)鐘(zhong)左(zuo)右（2000-3000轉/分(fen)）。仔細(xi)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(ying)再次離心。

（2）血漿：

應根據標本的要求選(xuan)擇EDTA、檸檬酸鈉或(huo)肝素作(zuo)為抗(kang)凝劑，混合10-20分(fen)鐘后，離心20分(fen)鐘左(zuo)右（2000-3000轉/分(fen)）。仔(zi)細收(shou)集(ji)上清。保存過程中如有沉淀(dian)形成，應再次離心。

（3）尿液：

用無菌管(guan)收集(ji)。離心(xin)20分(fen)鐘左右（2000-3000轉(zhuan)/分(fen)）。仔細收集(ji)上(shang)清(qing)。保存過程中如有沉淀形成，應(ying)再次離心(xin)。胸腹(fu)水、腦脊液(ye)參照此實(shi)行。

（4）細(xi)胞培養上清：

檢測分泌(mi)性的成(cheng)份時(shi)，用無(wu)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上(shang)清。

（5）培養細胞

檢測細(xi)胞內的成份時，用(yong)PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xi)胞懸液，細(xi)胞濃度(du)達到100萬/ml左(zuo)右(you)。通過反復凍融或加入組織蛋(dan)白萃(cui)取試劑，以使細(xi)胞破壞并放(fang)出(chu)細(xi)胞內成份。離心20分(fen)鐘左(zuo)右(you)（2000-3000轉/分(fen)）。仔細(xi)收集上清。保存過程中如(ru)有沉淀形成，應再次離心。

（6）組織標本

切割(ge)標(biao)(biao)本(ben)后(hou)(hou)，稱取(qu)重量。加入(ru)一定量的PBS，PH7.4。用(yong)液氮迅速冷(leng)凍保存備用(yong)。標(biao)(biao)本(ben)融化后(hou)(hou)仍(reng)然保持2-8℃的溫度。加入(ru)一定量的PBS（PH7.4），或組織(zhi)蛋白(bai)萃取(qu)試劑, 用(yong)手(shou)工(gong)或勻(yun)漿器將標(biao)(biao)本(ben)勻(yun)漿化。離心(xin)20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后(hou)(hou)一份(fen)待檢測，其余冷(leng)凍備用(yong)。

Phospho-ATP1A1 (Ser16)    磷酸化鈉鉀(jia)ATP酶(mei)蛋白a1抗體

Acetyl CoA Carboxylase    乙酰羧化酶抗體

Phospho-Acetyl Coenzyme A carboxylase alpha (Ser78)    磷(lin)酸化乙酰羧化酶抗體

Phospho-Ack1 (Tyr859 + 860)    磷酸化Ack1抗體

phospho-AMPK alpha-1(Ser485+Ser491)    磷酸(suan)化(hua)腺苷單磷酸(suan)活化(hua)蛋白激(ji)酶α1抗體(ti)

phospho-AMPK beta 1 (Ser108)    磷酸化(hua)(hua)腺苷單磷酸活化(hua)(hua)蛋白激酶β1抗體

phospho-ALK (Tyr1604)    磷酸化間變型淋巴瘤激(ji)酶抗體

phospho-ATM(Ser1981)    磷(lin)酸化(hua)毛細血(xue)管擴張性共濟失(shi)調癥突變蛋白抗體(ti)

phospho-ATP citrate lyase (Ser455)    磷(lin)酸(suan)化(hua)三磷(lin)酸(suan)腺檸檬酸(suan)裂解酶抗體

phospho-ATR (Ser428)    磷酸化ATR抗體

AMN1    細胞核重定位及紡錘(chui)體檢查點蛋白AMN1抗體

ALG11    天(tian)連(lian)接糖基化11抗體

ASF1A    細胞衰老相關(guan)蛋白ASF1A抗體

AGPHD1    氨基(ji)糖苷類磷酸結構域蛋(dan)白抗(kang)體

ASGPR1    唾(tuo)液(ye)酸糖(tang)蛋白受(shou)體1抗體

ARSF    芳香(xiang)基硫(liu)酸(suan)酯酶F抗體    NE-B重酒石酸(suan)ISA試劑盒    NE-B ELISA Kit    48T/96T

TAF腫(zhong)瘤血管生長因子ELISA試(shi)劑盒    TAF ELISA Kit    48T/96T

TAA腫瘤相關抗原ELISA試劑(ji)盒    TAA ELISA Kit    48T/96T

TSTA腫(zhong)瘤特(te)異性移植(zhi)抗原ELISA試劑盒  ;  TSTA ELISA Kit    48T/96T

TSGF腫瘤特異性生長(chang)因子ELISA試劑盒    TSGF ELISA Kit    48T/96T

TSA腫瘤特異(yi)性(xing)抗(kang)原ELISA試劑盒    TSA ELISA Kit    48T/96T

TGSF腫瘤特異(yi)生長(chang)因子(zi)/腫瘤相關因子(zi)ELISA試劑盒(he)    TGSF ELISA Kit    48T/96T

TNFAIP6腫瘤壞死因子誘導基因6蛋(dan)白ELISA試劑盒    TNFAIP6 ELISA Kit    48T/96T

TWEAK腫瘤壞(huai)死(si)因子相關(guan)弱凋亡誘導(dao)因子ELISA試劑(ji)盒    TWEAK ELISA Kit    48T/96T

TRANCE腫瘤(liu)壞死因(yin)子相關激活誘導因(yin)子ELISA試劑盒    TRANCE ELISA Kit    48T/96T

TRAIL-R3腫瘤壞死因子相關凋亡誘(you)導配體受體3ELISA試劑盒    TRAIL-R3 ELISA Kit    48T/96T

TRAIL-R2/DR5腫瘤(liu)壞死因子相關凋亡誘導配體(ti)受體(ti)2ELISA試劑盒(he)    TRAIL-R2 ELISA Kit    48T/96T

TRAIL-R4腫瘤壞死因(yin)子相關凋亡誘導配體(ti)4ELISA試劑盒    TRAIL-R4 ELISA Kit    48T/96T

TRAIL-R3腫(zhong)瘤壞死因子相(xiang)關凋亡誘導配體3ELISA試劑盒    TRAIL-R3 ELISA Kit    48T/96T

TRAIL-R1腫瘤(liu)壞死因子相關凋(diao)亡誘導(dao)配(pei)體1ELISA試(shi)劑盒    TRAIL-R1 ELISA Kit    48T/96T

TRAF6腫瘤壞死因子(zi)受體相關因子(zi)6ELISA試劑盒    TRAF6 ELISA kit    48T/96T

TRAF1腫瘤壞(huai)死因(yin)子受體相關因(yin)子1ELISA試劑盒    TRAF1 ELISA kit    48T/96T

TNFRSF18腫瘤(liu)壞死(si)因子受體超(chao)家(jia)族成員(yuan)18ELISA試劑盒    TNFRSF18 ELISA KIT    48T/96T

TNFsR-Ⅱ腫瘤壞死因(yin)子可溶性(xing)受體(ti)ⅡELISA試劑盒    TNFsR-Ⅱ ELISA Kit     48T/96T

TNFsR-Ⅰ腫瘤(liu)壞死(si)因子可溶性受體ⅠELISA試劑(ji)盒    TNFsR-ⅠELISA Kit     48T/96T

TL1A/TNFSF15腫瘤壞(huai)死(si)因子超家族(zu)15ELISA試劑盒    TL1A/TNFSF15 ELISA Kit    48T/96T

TBA總膽汁酸ELISA試劑盒腫瘤壞死(si)因子γELISA試劑盒    TNFγ ELISA Kit    48T/96T

TNFβ腫瘤壞(huai)死(si)因子βELISA試劑(ji)盒    TNFβ ELISA Kit    48T/96T

TACE腫瘤壞死(si)因子α轉化(hua)酶ELISA試劑盒    TACE ELISA Kit    48T/96T

操(cao)作步驟：

1.標準品的稀釋：本試劑(ji)盒(he)提(ti)供(gong)原(yuan)倍標準品一支(zhi)，用(yong)戶可按照下列圖表在小試管(guan)中進行稀釋。

2.加樣(yang)(yang)(yang)(yang)：分別設空白(bai)孔（空白(bai)對(dui)照孔不(bu)加樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)及(ji)酶標試劑，其余各步(bu)操(cao)作相同）、標準孔、待測樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)孔。在酶標包被板上標準品(pin)準確(que)加樣(yang)(yang)(yang)(yang)50μl，待測樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)孔中先加樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)稀釋液40μl，然后再(zai)加待測樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)10μl（樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)最終稀釋度為5倍）。加樣(yang)(yang)(yang)(yang)將(jiang)樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)加于酶標板孔底部，盡量不(bu)觸及(ji)孔壁，輕輕晃動混勻(yun)。

3.溫育(yu)：用封(feng)板(ban)(ban)膜封(feng)板(ban)(ban)后置37℃溫育(yu)30分鐘。

4.配液(ye)：將(jiang)30倍濃縮洗滌液(ye)用蒸(zheng)餾水30倍稀釋后備(bei)用。

5.洗(xi)滌(di)：小心(xin)揭(jie)掉封板膜，棄(qi)去(qu)液(ye)體，甩干(gan)，每孔(kong)加滿洗(xi)滌(di)液(ye)，靜置30秒后棄(qi)去(qu)，如此重復5次(ci)，拍干(gan)。

6.加(jia)酶：每(mei)孔(kong)加(jia)入(ru)酶標試(shi)劑50μl，空白孔(kong)除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌(di)：操作同5。

9.顯(xian)色(se)：每孔(kong)先加(jia)(jia)入(ru)顯(xian)色(se)劑A50μl，再加(jia)(jia)入(ru)顯(xian)色(se)劑B50μl，輕輕震蕩混(hun)勻(yun)，37℃避(bi)光(guang)顯(xian)色(se)15分鐘。

10. 終(zhong)止(zhi)：每孔(kong)加終(zhong)止(zhi)液50μl，終(zhong)止(zhi)反應（此時藍色立轉黃色）。

11. 測(ce)定：以(yi)空(kong)白空(kong)調(diao)零(ling)，450nm波長依序測(ce)量各孔的吸光度（OD值）。 測(ce)定應在加(jia)終止液后(hou)15分鐘以(yi)內進(jin)行。